编者导语
很是荣幸邀请到袁超博士做客“临床质谱网媒体平台”。我们会在“专家讲坛”栏目中连续宣布袁老师有关临床质谱的精彩干货内容 ，以飨读者。本期袁老师为各人带来滋扰物的精彩解读。
作者简介
袁超博士
现任美国华人临床化学学会主席 ，美国大型临床检测实验室质谱实验室主任。于四川大学获得生物化学学士学位、美国堪萨斯大学获得生物化学博士学位 ，其后在霍普金斯和伊利诺伊大学做博士后 ，主要研究偏向为卵白质组和质谱。袁超博士最近十年主要从事临床质谱要领开发和应用。
第十节 滋扰物
滋扰物是临床检测的要领验证里必做的一项。可是滋扰物对差别的科室来说 ，寄义大纷歧样。如果说临床化学是一棵树的话 ，每一个科室 ，好比化学 ，免疫 ，另有质谱 ，只是这棵树上的一个分支。滋扰物就像树上的鸟 ，划分站在每一个枝头。可是此鸟非彼鸟 ，化学要领里的滋扰物在许多情况下是不会滋扰免疫和质谱要领的。但因为历史的原因 ，每次验证质谱要领时都要把化学要领里的滋扰物测一遍 ，而该测的滋扰物往往漏掉了 ，在厥后的事情中会造成麻烦。所以质谱法的滋扰物测定要有特殊的程序。
化学光吸收法里的滋扰物主要是溶血 ，脂血 ，和黄疸 ，因为这些物质都可能吸收、反射、或折射光波。免疫法里要测的滋扰物应当包括种种自身抗体 ，人抗动物抗体、抗试剂抗体、生物素、交叉反应 ，等等能影响抗体抗原反应的物质。免疫法并不是一个直接的检测手段 ，要通过抗原抗体的结合来爆发。而抗体抗原反应又比较庞大 ，容易被滋扰。这也是各人普遍认为质谱法特异性更好的原因。在质谱检测里 ，被测物从上千种物质里逐步被疏散出来 ，最后撞在光电倍增管里 ，爆发一个电子信号 ，作为定性和定量的基础 ，其特异性是其它要领不可相比的。但这不体现质谱法里就没有滋扰物了。
在液质联用的要领里 ，能成为滋扰物是一件很禁止易的事情 ，必须和被测物是isocratic 和 isobaric。也就是说在色谱上和在质谱上都是分不开的。色谱的疏散是基于疏水性 ，分子结构等理化性质。如果某种物质的理化性质和被测物相近 ，那就会和被测物一起从色谱柱里出来。如果这个物质不可被质谱检测到 ，那就只是会和被测物以及内标争抢离子 ，形成离子抑制。如果它正好和被测物的分子量相同 ，而碰撞断裂后有相同的离子片段 ，那就会被质谱检测到 ，成为“能看得见”的滋扰物。
滋扰物往往不会和被测物的保存时间完全一样 ，这样就形成了一个多余的峰肩 ，在主峰的前或后。滋扰物的峰型有可能差池称 ，因为我们的色谱梯度不是针对滋扰物来设计的。这种情况下就会形成拖尾。这样的峰与被测物的峰叠加在一起 ，形成不正常的峰型 ，很容易被看出来。不但单是被测物有滋扰物 ，内标也会有滋扰物。内标的滋扰物往往会把内标的峰面积增加 ，很容易被看出来。在要领开发时 ，可以做一批不加内标的病人样品 ，看哪一个离子比照较洁净 ，就选用哪一个。要领开发好上了临床以后会碰到许多意想不到的问题。一般一个新要领上临床一年以后没有问题才算可靠。季节性的药物 ，新药 ，新的抽血的管子 ，新的试剂 ，新的包装等等 ，这些都有可能含有滋扰物。所以在要领开发和验证时可以多选用几个备用的离子对 ，一旦有滋扰物 ，可以顶上。一般选2-4个。
说起离子对的选择 ，这里面的学问许多。大大都人是选品貌最高的那一个。我的经验是选品貌高的离子对不如选特异性好的。掉水 ，掉氨基 ，掉羧基 ，掉甲基、掉乙基的离子对特异性都不会好；碎片是苯环或苯环类似物的也欠好；如果用延伸的话 ，要注意不要用延伸化试剂的离子。内标的片段最好也是选用特异性的片段。好比掉HDO的片段就比掉H2O的特异性高许多。实际情况不可能包管每个化合物都能找到2-4个可用的离子对。有时候只能退而求其次。甚至连【母离子-母离子】这样的离子对我也用过。这个化合物就像个硬核桃 ，你用锤子敲它 ，劲儿使小了砸不开；劲大了 ，砸碎了 ，一地渣渣 ，找不出一个可用的片段。我只好选用了一个比把它砸碎了的能量小一点的碰撞电压 ，希望这个电压能把可能有的滋扰物砸碎 ，但我要的核桃照旧完整的。另外一个比较奇特的例子是碰撞后的不稳定性。这个化合物在碰撞后可以丢A基团 ，也可以丢B基团 ，但两个的信号都不稳定。这时候我选用了两者之和 ，信号才算是稳定下来了。不稳定的情况还会爆发在离子化这个阶段 ，尤其是溶液中的离子 ，好比盐 ，有可能附加在被测物之上 ，这样的话 ，会造成信号不稳。这个时候就要用一个小的电压去敲一下被测物 ，希望能把这个附带的离子敲下去。虽然 ，这一步爆发在进Q1之前 ，差别厂家对这个电压有差别的叫法。在这个环节另有一个气体 ，它的流动偏向是跟离子运动的偏向是相反的。我的经验是在不影响信号强度的情况下 ，把这个气的流速调的越大越好。因为反偏向吹 ，可以把杂质吹走。这个气的使用和以前手工扬麦的原理相似：麦子落下时 ，风可以把瘪的麦粒和麦皮给吹走了 ，饱满的麦粒笔直落下来 ，被纯化、富集。所以这个风速要调到大的恰好吹不走麦粒 ，才华减少污染物 ，滋扰物。建一个稳定的、洁净的、污染物少的质谱要领有许多窍门。因为篇幅限制 ，我不可能一一列举 ，先讲到这里。要害是要对仪器的种种参数的了解、运用、思考、和试错。
不管事前准备的多充分 ，实际情况是出乎意料的庞大。滋扰物的泛起往往防不堪防。怎样去发明有滋扰物呢？除了看得见的峰型的改变 ，另有两个指标。一个是离子对的比值 ，一个是保存时间。如果我们检测两个以上离子对 ，那他们之间的比值应该是相对牢固的 ，如果偏高或偏低 ，那就是有滋扰物了。偏高或偏低的界定在CLSI的规则里有。一般对低品貌的离子的要求相对较宽泛。所以在具体操作时可以在合乎划定的规模内做出对运营有利的选择。好比人为的加大碰撞电压 ，使定性的离子对的品貌降低 ，低到是定量的离子对的品貌的10%以下 ，这样就可以凭据划定选用一个比较宽的规模�Ａ碛幸恍┢渌记� ，好比同一离子的多次使用 ，因为用文字解释起来比较庞大 ，我就不在这里介绍了。规则里一个值得革新的地方是对浓度低的要求应该宽泛一些 ，因为这时候信号和噪音的差别已经不大了 ，尤其是到了已经没有临床意义的低浓度时。另外 ，厂家的软件也有待革新 ，浓度低时 ，如果离子比照值超标 ，这样的峰就不要特殊的标出来了 ，直接给个小的定量就可以了；如果定的量在LOQ之下 ，就没有须要再去深究是不是有滋扰物把离子对的比值搅散了。离子对的比值按理是应该稳定的 ，可是除了上述的浓度之外 ，另有其它因素。好比差别仪器 ，尤其是差别厂家的仪器之间；每次做完仪器维修之后；差别的流动相 ，等等 ，这些因素都会改变差别离子对之间的比值。有的厂家的软件设计的比较合理 ，是自动选用同一批次里的标准品的离子比照值来权衡病人样品。这样就会把其它滋扰因素给去掉。
从保存时间也可以看出有没有滋扰物。不是看绝对的保存时间 ，也不是看相对保存时间（相对保存时间是用在内标是类似物的情况下） ，而是看被测物和内标的保存时间的差值。氘标记的内标疏水性差 ，从反向柱出来的时间会稍早一点儿。如果是被测物先出来的话 ，就有可能混的有滋扰物了。具体用什么规模来权衡要从实际中来。标准品和质控品洁净 ，没有滋扰物。把他们的时间差算个平均数 ，规模是正负2SD或3SD就可以了。注意要在盘算时把软件里保存时间的小数点后面多放几位。保存时间的差值凌驾规模 ，甚至峰型都被改变了 ，也不见的就肯定有“看得见”的滋扰物。有可能是“看不见”的滋扰物捣的乱。这时 ，“看不见”的滋扰物只抑制了被测峰的部分（前半部或后半部） ，所以才会把峰型搅散 ，把保存时间挤的靠前或靠后 ，这时候可以用稀释法来检测（见上节）。最麻烦的是“看得见”和“看不见”的滋扰物同时保存 ，使得结果很不可靠。这时候就只能说“因为有滋扰物而出不了报告了”。另外滋扰物有可能是上一个样品里的 ，因为色谱没有洗洁净 ，杂质被带到了下一个样品里来了。把被滋扰的样品重新上次一样就可以解决这个问题。有的杂质多的样品会滋扰接下来的两个 ，甚至三个样品 ，或者直接就把色谱柱子给毁了。重复测一次 ，它又毁一根柱子。这种时候 ，我都想找客户倒赔我们钱。这种都是极端的例子 ，有些确实是因为病人在进行一项特殊的治疗 ，血液里有大宗的特殊药物。如果这种毁柱子的情况经常泛起的话 ，说明要领不敷好 ，需要把样品弄的更洁净些再进样。
如前所述 ，如果某个病人的内标的峰面积过大时 ，也可能是因为滋扰物引起的。所以内标最好也要使用几个离子对。许多规则里对内标的离子对数目没有硬性划定。可是我个人感受照旧有至少两个比较好。
另外 ，还要把滋扰物和污染物区别开。污染物就是被测的物质 ，可是不应该泛起在样品里。它的爆发原因五花八门。例如实验操作不规范 ，使用天平时没有清理洁净 ，把后面的试剂、溶液给污染了；厂商在产品制造历程历程中无意中引进的污染；员工自己无意引进的污染（吸烟者的尼古丁 ，有身妇女超高的雌激素 ，等等）。这种情况下 ，空白和双空白可以看出来。另外每次从厂家收到内标以后 ，都要单独检测一下 ，看里面有没有不带标记的被测物。虽然软件里可以用数学的要领把内标里混进去的被测物去掉 ，但最好是拿到洁净的内标为最好。
如果真的泛起滋扰物了 ，怎么办？首先是换一下离子对 ，看问题能不可解决。如果备用的离子对是好的 ，并且也被验证过 ，那报告是可以出的。如果发明大大都被滋扰的样品都可以用备用的离子对解决 ，那可以考虑永久的换一下离子对。有时候自己实验室解决不了 ，可以把样品送到其他实验室 ，换一个要领说未必就不滋扰了。
建质谱要领时 ，要测试可能成为滋扰物的类似物�？梢圆槲南卓匆郧坝心男┍ǖ�；可以查分子库 ，看有没有分子量相近的化合物。有的话 ，要拿来测一测。这个要比测溶血 ，脂血更有意义。
本节的总结：
1. 质谱法的滋扰物有别于其他要领 ，只有色谱和质谱都分不开的物质才有可能成为滋扰物。
2. 滋扰物可以从峰型 ，保存时间 ，和离子品貌比值来鉴定出来。
3. 解决滋扰物的问题要从建要领时开始 ，需要有大宗的仪器操作和要领开发的经验。
4. 真是有解决不了的问题 ，只能老老实实的在报告里说明 ，不要把不可靠的结果上传。
声明：本文章来源“临床质谱网” ，作者：袁超博士 ，大发welcome生物已获得临床质谱网和袁超博士授权 ，如需转载 ，请联系原作者！
就是现在
您有新的想法想与我们谈谈？那现在就联系大发welcome吧。
